296位氨基酸位阻效應影響黃花蒿沒藥醇合酶環化反應的起始
作者：賀芳; 郝慶剛; 趙慧芳; 穆星; 楊倩; 劉會云; 李振秋 河北大學生命科學學院; 河北保定071002
摘要：【目的】探究黃花蒿沒藥醇合酶第296位氨基酸突變抑制環化反應的機制。【方法】利用Quik Change R Multi Site-Directed Mutagenesis的方法將黃花蒿沒藥醇合酶的296位氨基酸殘基由蘇氨酸突變成異亮氨酸。原核表達,蛋白純化后測定其催化特異性。【結果】黃花蒿沒藥醇合酶T296I體外催化（2E,6E）-法尼基焦磷酸主產物為非環化的法尼烯;但是將T296I蛋白與中間體（3R,6E）-橙花叔醇焦磷酸一起孵育時可生成環化的主產物α-bisabolol,野生型酶的天然產物。【結論】黃花蒿沒藥醇合酶T296I點突變進一步證明氨基酸殘基的空間體積和立體化學是自然環化反應起始的控制關鍵,其位阻效應能夠抑制法尼基焦磷酸向橙花叔醇焦磷酸轉化。
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