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塞內加谷病毒3C蛋白生物信息學分析及真核質粒構建表達

作者:陳瑛琪; 蔡瑤; 李雨濛; 徐逸飛; 徐志文; 朱玲 四川農業大學動物醫學院; 成都611130; 四川農業大學動物疫病與人類健康四川省重點實驗室; 成都611130

摘要:3C蛋白是塞內加谷病毒重要的非結構蛋白之一,在病毒入侵機制及影響宿主抗病毒天然免疫方面發揮重要作用。試驗應用Oligo 7.0和Primer 6.0軟件,用BLAST對比SVV世界參考株,設計一對特異性引物。以SVV-SN株病毒液抽提RNA為模板,將序列連接pMD19-T載體后測序,對正確片段作生物信息學分析可知SVV 3C可編碼一個較穩定非分泌型蛋白,具有一個保守“催化三聯體”。預測發現該蛋白具有16個磷酸化位點,證明其較高活性,預測其二級結構后得到再次證實。將pMD19-SVV-3C和真核表達載體pcDNA3.1(+)雙酶切后連接,重組質粒經鑒定后命名為pcDNA3.1(+)-SVV-3C。將pcDNA3.1(+)-SVV-3C轉染到BHK-21細胞24 h后制樣作Western blotting,成功驗證該重組質粒可在BHK-21中真核表達。相比其他同科病毒,當前SVV 3C蛋白研究存在空白。文章旨在為進一步研究SVV 3C蛋白結構提供理論依據,為后續探索SVV 3C蛋白對于宿主作用機制奠定基礎。

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東北農業大學學報

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