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兔出血癥病毒VP60蛋白單克隆抗體的制備及活性鑒定

作者:楊慧; 武玉香; 王文秀; 孫培姣; 于雪; 王玉茂; 沈志強; 肖躍強 山東省濱州畜牧獸醫研究院; 山東濱州256600; 山東綠都生物科技有限公司; 山東濱州256600

摘要:為制備兔出血癥病毒VP60單克隆抗體,利用HEK293T細胞瞬時表達VP60,免疫Balb/c小鼠,將小鼠脾細胞與SP2/0骨髓瘤細胞融合,間接ELISA篩選獲得陽性克隆細胞株-5D11。利用血凝抑制(HI)、間接免疫熒光(IFA)和Westernblot等方法對5D11分泌的單克隆抗體活性進行鑒定,并對其識別區域進行了定位。結果顯示,5D11能抑制病毒凝集人“O”型紅細胞,與桿狀病毒表達的VP60蛋白發生特異性抗原抗體反應,且其識別VP60蛋白線性抗原表位,并定位于494aa-579aa區段。成功制備了抗VP60蛋白單克隆抗體,為開展病原學檢測、流行病學研究等奠定了基礎。

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