杜仲EuCHIT1基因表達載體構建及在大腸桿菌中的表達
作者：董旋; 丁延慶; 冉昕; 趙德剛 貴州大學農業生物工程研究院/生命科學學院山地植物資源保護與種質創新省部共建教育部重點實驗室; 綠色農藥與農業生物工程國家重點實驗室培育基地; 貴州省山地生態與農業生物工程2011協同創新中心
摘要：構建了T7啟動子驅動杜仲幾丁質酶基因EuCHIT1的原核表達載體pET-EuCHIT1和pMCSG-EuCHIT1,其表達產物分別含6個組氨酸(6His)標簽和6個組氨酸連接的麥芽糖結合蛋白(his6-tag–maltose-binding protein,MBP)標簽,分別將重組載體遺傳轉化大腸桿菌細胞BL21(DE3),在37℃、150 rpm條件下培養至菌液OD值為0.4~0.8后,轉到16℃、150 rpm條件下以1 m MIPTG誘導培養12 h,表達產物經SDS-PAGE分析,p ET-EuCHIT1/BL21(DE3)表達以包涵體形式存在36.03 kD融合蛋白,pMCSG-EuCHIT1/BL21(DE3)成功表達可溶形式存在的77.21 kD融合蛋白。故可以使用pMCSG-EuCHIT1/BL21(DE3)獲得可溶的融合蛋白,為之后的EuCHIT1的多克隆抗體的制備和及功能研究奠定基礎。
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