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擬南芥細胞周期基因AtCDC5的功能研究及抗體制備

作者:徐金龍; 梁爽; 郁飛 西北農林科技大學生命科學學院; 陜西楊陵712100

摘要:MYB相關CDC5(Cell division cycle 5)蛋白對于細胞周期G2期的正常進行是必須的,但是在植物中對這種蛋白質的研究還較少涉及。本試驗測量比較野生型擬南芥(Col-0生態型)和AtCDC5T-DNA插入缺失突變體(GK_278B09)的主根生長速度和長度,利用瞬時表達AtCDC5-GFP研究AtCDC5在擬南芥葉片葉肉細胞中的定位,同時利用AtCDC5N端144個氨基酸在大腸桿菌中進行原核表達和純化,免疫家兔獲得針對AtCDC5的多克隆特異性抗體,從表型、細胞和蛋白質水平研究AtCDC5基因的功能。結果表明,GK_278B09的主根因發育受到抑制而生長速度緩慢;AtCDC5-GFP融合蛋白主要定位于細胞核中;經過分離得到的AtCDC5蛋白抗血清能夠有效地檢測出10ng原核表達的AtCDC51-144抗原,并在原生質體AtCDC5過表達體系中檢測出1條分子量約為120000的條帶,此條帶與AtCDC5-GFP大小相近。本研究成功制備出AtCDC5蛋白的多克隆抗體,為進一步研究AtCDC5蛋白影響細胞周期從而影響植物生長發育提供了研究基礎。

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