利用CRISPR/Cas9構建斑馬魚tbx20基因突變體及其功能分析
作者：朱哲; 胡沛男; 李偉明; 祖堯 上海海洋大學科技部海洋生物科學國際聯合研究中心; 上海201306; 上海海洋大學水產種質資源發掘與利用教育部重點實驗室; 上海201306; 上海海洋大學水產科學國家級實驗教學示范中心; 上海201306
摘要：轉錄因子TBX20在脊椎動物心臟的腔室發育和維護中起至關重要的作用。利用CRISPR/Cas9系統成功制備了斑馬魚tbx20突變魚系,T7E1檢測結果顯示F0敲除效率平均為42. 1%,測序分析F1中突變種質遺傳效率為36. 7%。F2突變體中觀察到心臟突變表型:48 hpf,心包腔腫大,靜脈竇瘀血,環化異常,心臟結構變形;3 dpf,心臟畸形拉伸成線狀結構。原位雜交和qRT-PCR結果顯示,突變體中vmhc表達上調,amhc和myl7表達下調。成功制備了斑馬魚tbx20突變體,結果表明tbx20純合突變體心臟畸形,環化受到影響,為深入探究tbx20在早期心臟腔室分化過程中的作用奠定了基礎。
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