重組人表皮生長因子包涵體的表達、純化及復性
作者：王強; 段云飛; 徐燕; 張超; 冷曉燕 江蘇邁健生物科技發展股份有限公司; 江蘇無錫214000
摘要：目的:通過優化人表皮生長因子(hEGF)基因序列,利用大腸桿菌大量表達重組hEGF(rhEGF)包涵體,經過包涵體純化復性獲得高活性的rhEGF。方法:采用全基因合成優化后的序列,克隆至pET-30a表達載體中,轉化大腸桿菌BL21(DE3),經IPTG誘導表達,將rhEGF包涵體用尿素溶解后過Ni柱純化并稀釋復性,根據藥典對得到的rhEGF進行純度及活性測定。結果:構建了rhEGF的表達載體pET-30a-rhEGF,表達出的蛋白主要存在于包涵體中,相對分子質量為6.5×10^3,包涵體經過純化復性后獲得的rhEGF純度可達92.8%,生物活性約4.94×10^7IU/mg。結論:得到了具有較高活性的rhEGF。
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