利用CRISPR/Cas9技術構建環指蛋白126基因敲除小鼠
作者：高夢樵; 艾東旭; 李鈺; 孫菲; 王進; 范君文; 袁征; 劉源; 孫兆增 軍事醫學研究院實驗動物中心; 北京100071; 塔里木大學生命科學學院; 阿拉爾市843300
摘要：目的利用CRISPR/Cas9技術,獲得環指蛋白126(RNF126)基因敲除小鼠模型。方法針對C57BL/6小鼠Rnf126基因的第四外顯子設計敲除引物,構建sgRNA重組表達載體。通過體外轉錄獲得sgRNA及Cas9 mRNA,并以顯微注射的方式將RNA導入到C57BL/6小鼠的受精卵中,通過胚胎移植至代孕母鼠。獲得子代工程鼠后,用PCR對其進行鑒定。結果成功獲得針對鼠Rnf126基因的sgRNA以及Cas9 mRNA;通過顯微注射獲得了82枚狀態良好的受精卵并成功移植至3只代孕母鼠體內;獲得了11只F0代仔鼠,鑒定后選擇一只單鏈缺失62個堿基的陽性鼠進行擴繁并在F1、F2代檢測到該突變。結論成功構建Rnf126基因敲除C57BL/6小鼠,該模型可用于RNF126基因及其表達產物的生物學功能研究。
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