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利用流式細胞法鑒定馬鈴薯倍性方法的優化

作者:王婷婷; 張光海; 蔡汶玻; 郭華春 云南農業大學; 云南昆明650201

摘要:為了建立適于馬鈴薯倍性鑒定的流式細胞法試驗體系,以二倍體馬鈴薯‘E’和四倍體馬鈴薯‘青薯9號’為材料,分別利用LB01,Galbraith's和Tris·MgCl2 3種細胞核分離緩沖液制備馬鈴薯組培苗幼葉單細胞核懸浮液,比較離心和不離心及不同核酸染料碘化丙啶(Propidiumiodide,PI)和4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)對流式細胞儀檢測結果的影響。結果表明,3種核分離緩沖液對制備馬鈴薯組培苗幼葉單細胞核懸浮液存在差異,其中核分離緩沖液LB01的效果最好;不離心的效果和離心相比,離心的懸浮液中目的細胞少于不離心的;染料DAPI與PI相比,染色效果無明顯差異。從而初步建立起一套利用流式細胞術鑒定馬鈴薯倍性的方法,該方法樣品需求量小,且制備簡單,測量快速,準確度高,背景碎片和雜峰較少,主峰清晰,是鑒定馬鈴薯染色體倍性的理想方法。

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中國馬鈴薯

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