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B型流感病毒在MDCK細胞上的遺傳穩定性

作者:劉飛雪; 單亞明; 趙大鵬; 張雪梅 長春生物制品研究所有限責任公司疫苗六室; 吉林長春130012; 吉林大學生命科學學院艾滋病疫苗國家工程實驗室; 吉林長春130012

摘要:目的研究流感病毒NYMC BX-51B株在MDCK細胞上連續傳代的遺傳穩定性。方法將SPF級雞胚制備的流感病毒NYMC BX-51B尿囊液毒株接種至MDCK細胞上,連續傳代培養至10代(M1~M10),參照《中國藥典》三部(2015版)毒種檢定方法進行支原體和無菌檢查、外源因子檢查、鑒別試驗,并進行血凝試驗和病毒滴度檢測。提取尿囊液、M1代、M10代病毒總RNA,RT-PCR法擴增血凝素(hemagglutinin,HA)和神經氨酸酶(neuraminidase,NA)基因,并進行測序。結果流感病毒NYMC BX-51B株在MDCK細胞上連續傳代培養至M10代,血凝滴度最高可達1∶256,病毒滴度最高可達6. 5 LgCCID50/mL;鑒別試驗、無菌檢查、支原體檢查、外源因子檢查結果均符合藥典要求。尿囊液、M1代、M10代病毒的HA和NA基因的氨基酸序列與GenBank中登錄的流感病毒NYMC BX-51B的HA和NA基因比對結果完全一致。結論 NYMC BX-51B型流感病毒在MDCK細胞基質上連續傳代培養至M10代,遺傳穩定性良好,為MDCK細胞基質流感疫苗的研究和生產奠定了基礎。

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中國生物制品學

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