非洲豬瘟病毒熒光RPA快速檢測方法的建立及初步應用
作者：林彥星; 曹琛福; 曾少靈; 花群俊; 楊俊興; 黃超華; 史衛軍; 花群義 深圳海關動植物檢驗檢疫技術中心; 廣東深圳518045; 云南省武定縣動物疫病預防控制中心; 云南武定651601
摘要：本研究根據非洲豬瘟病毒(ASFV)基因組中序列保守穩定的B646L基因設計特異性引物和探針,建立了敏感、特異、高效的ASFV核酸RPA快速檢測法。結果顯示,該方法特異性強,能準確檢測ASFV核酸,與豬瘟病毒(CSFV)、豬繁殖與呼吸綜合征(PRRSV)、豬圓環病毒Ⅱ型(PCV2)、口蹄疫病毒(FMDV)、豬A型塞內卡病毒(SVA)等滅活病毒核酸無交叉反應;敏感性高,本試驗中最低可檢測到2×101copies/uL;檢測時間短,15 min即可完成反應;重復性好。采用ASFV滅活抗原和豬血液制備模擬臨床豬血樣品,能檢出滅活抗原的稀釋度為1∶12 800,應用該方法對200份進口凍豬產品及供港豬場420份豬抗凝血進行檢測,結果均為陰性,與OIE推薦的實時熒光PCR法檢測結果相同。本研究建立的RPA快速檢測法操作簡便,尤其適合ASFV現場快速檢測。
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