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偽狂犬病病毒UL56蛋白與宿主蛋白Nedd4相互作用的研究

作者:王書文; 呂闖; 蔡雪輝 吉林農業大學動物科學技術學院; 吉林長春130118; 中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所獸醫生物技術國家重點實驗室; 黑龍江哈爾濱150069

摘要:偽狂犬病病毒(PRV)UL56蛋白(pUL56)屬于Ⅱ型膜蛋白。近期研究結果表明PRVpUL56與PRV對嚙齒動物的致病性相關。為揭示PRVpUL56與宿主相互作用的分子基礎,本研究通過免疫共沉淀(Co-IP)試驗確定了pUL56與神經前體細胞表達的發育下調蛋白4(Nedd4)存在相互作用。進一步,利用激光共聚焦試驗確定過表達pUL56與Nedd4在轉染HEK293T細胞的高爾基體存在共定位。通過互作,pUL56可以將細胞質分布的Nedd4重新定位于高爾基體。前期研究表明,含有WW結構域的宿主蛋白可以與含有PPxY(PY)基序的病毒蛋白互作。因此,本研究構建了pUL56PY基序丙氨酸突變體(PPxY/AAxY),利用Co-IP試驗對pUL56突變體和Nedd4相互作用進行驗證,結果表明隨著pUL56PY基序突變的增加,蛋白互作能力逐漸減弱。此外,pUL56通過其PY基序顯著下調Nedd4的表達。這些結果證實了PRVpUL56與Nedd4主要通過WW結構域/PY基序模式發揮相互作用,并下調Nedd4的表達。因此,本研究為闡明PRVpUL56與宿主相互作用的分子機制提供了參考依據。

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