摘要:目的建立小鼠Thl7細胞體外培養方法并研究姜黃素對Thl7細胞分化、功能的影響及機制。方法分離、純化小鼠脾臟CD4^+CD25-T細胞,培養體系內加入抗CD3、抗CD28抗體活化,并加入轉化生長因子(TGF)-β、白細胞介素(IL)-6、IL-23、抗干擾素-1抗體、抗IL-2抗體等促進Thl7細胞分化。培養的Thl7細胞分為對照組、姜黃素低劑量(5pμmol/L)及高劑量(25μmol/L)組、西羅莫司(100ng/m1)組。流式細胞術檢測Thl7細胞比例,熒光定量聚合酶鏈反應(PCR)及蛋白印跡法檢測視黃酸相關孤兒受體(ROR)γt表達水平及信號轉導和轉錄活化因子(STAT)3磷酸化水平,最后檢測細胞IL-17A、IL-21mRNA相對表達量。采用t檢驗、單因素方差分析對實驗結果進行統計學處理。結果本方案可明顯促進Thl7細胞分化。與對照組相比,姜黃素低組、高劑量組及西羅莫司組Thl7細胞比例明顯降低[分別為(54.1±3.4)%、(40.3±2.8)%、(25.8±2.3)%、(25.0±2.0)%,t值為6.15,12.63,12.97,P值均〈0.01]。姜黃素低劑量組、高劑量組及西羅奠司組RORγt的mRNA水平、蛋白水平、STAT3磷酸化水平以及IL-17A、IL-21mRNA水平均較對照組明顯降低[(IL-17AmRNA分別為0.81±0.05,0.61±0.05,0.58±0.05,1.01±0.11,t值為4.81,8.52,8.89,;IL-21mRNA分別為0.73±0.06,0.49±0.03,0.59±0.03,1|12±0.11,t值為5.98,9.22,7.95;P值均〈0.01],且姜黃素高劑量組IL-21mRNA水平較西羅莫司組降低(P〈0.05)。結論姜黃素體外可以抑制小鼠脾臟CD4^+CD25^-T細胞向Thl7細胞分化,并抑制IL-17A、IL-21mRNA合成,其機制可能與抑制細胞內孤兒受體RORγt表達及STAT3磷酸化有關。
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