摘要:目的 探討在石英刺激的人胚肺成纖維細胞(human embryo lung fibroblasts,HELF)中細胞外信號調節蛋白激酶(ERK)、應激活化蛋白激酶(JNK),細胞周期蛋白DI(cyclin D1)通路在石英誘導的細胞周期改變中的作用.方法 建立穩定轉染轉錄因子AP-1熒光素酶報告基岡質粒的HELF系(HELF-AP-1)及AP-1熒光素酶報告基因質粒與絲裂素活化蛋白激酶(MAPK)顯性失活突變體質粒(DN-ERK、DN-JNK和DN-p38)分別共轉染的HELF系(簡稱DN-ERK、DN-JNK和DN-p38).將HELF-AP-1、DN-ERK、DN-JNK和DN-p38細胞分為對照組和石英組(共8組),各對照組不加任何處理,石英組用200 μg/ml石英處理HELF細胞24 h.用免疫印跡(Western blot)法和免疫熒光法檢測cyclin D1、細胞周期蛋白依賴激酶4(CDK4)和E2F-4蛋白表達;采用顯性失活突變體技術驗證MAPKs信號轉導通路的上下游關系及其與細胞周期的關系;用流式細胞術檢測細胞周期變化.結果 HELF-AP-1+石英組G1期細胞所占比例下降,S期細胞所占比例升高,與HELF-AP-1對照組的差異有統計學意義(P<0.05).抑制ERK或JNK表達后,與HELF-AP-1對照組比較,DN-ERK+石英組和DN-JNK+石英組G1期細胞百分比無明顯變化.抑制p38后,DN-p38+石英組G1期細胞百分率明顯下降,與HELF-AP-1對照組的差異有統計學意義(P<0.05).與HELF-AP-1石英組比較,DN-ERK+石英組和DN-JNK+石英組CDK4表達降低和E2F-4表達增多,而DN-p38+石英組CDK4表達和E2F-4表達沒有改變.與HELF-AP-1+石英組比較,DN-ERK+石英組和DN-JNK+石英組cyclin D1表達降低,而DN-p38+石英組cyclin D1沒有改變.結論 ERK和JNK通過cyclin D1和CDK4介導石英誘導的HELF的細胞周期改變,而石英誘導的細胞周期改變與p38無關.
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